Бес күш:
● Нуклеин қышқылын алу және тазартылған қадаммен конфигурацияланған құрал
● Ультрадыбыстық экстракция модулімен конфигурацияланған құрал
● Толық автоматты түрде конфигурацияланған құрал
● Айнымалы температураны күшейту арқылы конфигурацияланған құрал
● Құрал толығымен жабық реагенттер жинағымен конфигурацияланған
1. Нуклеин қышқылын анықтау реагенттерін экстракциялау және тазарту қажет пе?
Нуклеин қышқылын анықтау принципі келесідей: праймердің әсерінен ДНҚ-полимераза ДНҚ/РНҚ шаблонында тізбекті реакцияны күшейту үшін қолданылады (НА кері транскрипциясын қажет етеді), содан кейін флуоресцентті сигналдың бөлінетін көлемін анықтау үшін анықталады. үлгіде анықталатын қоздырғыштың нуклеин қышқылы (ДНҚ/РНҚ) бар ма.
1) Экстракцияланбаған немесе тазартылмаған үлгілер соңғы нәтижеге әсер ететін көптеген компоненттерді қамтуы мүмкін: нуклеаза (мақсатты нуклеин қышқылын ерітіп, жалған теріс тудыруы мүмкін), протеаза (ДНҚ полимеразаны азайтып, жалған теріс тудыруы мүмкін), ауыр металл тұз (бұл синтазаның инактивациясына әкеліп соғады және жалған позитивті ), тым қышқыл немесе тым сілтілі PH (реакцияның сәтсіздігіне әкелуі мүмкін), толық емес РНҚ (жалған теріс кері транскрипцияның бұзылуына әкеледі).
2) Кейбір үлгілерді тікелей күшейту қиын: Грам-оң және кейбір паразиттер, олардың қалың жасуша қабырғалары мен басқа құрылымдарына байланысты, егер олар нуклеин қышқылының экстракциясы мен тазарту процесінен өтпесе, экстракциясыз жинақ мұндайлар үшін істен шығуы мүмкін. үлгілері.
Сондықтан нуклеин қышқылын алу қадамымен конфигурацияланған сынақ жинағын немесе құралды таңдау ұсынылады.
2. Химиялық экстракция немесе физикалық ультрадыбыстық фрагментация экстракциясы?
Жалпы алғанда, химиялық экстракцияны алдын ала өңдеу мен тазартудың көпшілігінде қолдануға болады.Дегенмен, қалың қабырғалы грам-позитивті бактериялар мен кейбір паразиттерде химиялық экстракция нуклеин қышқылының тиімді үлгілерін ала алмайды, бұл жалған теріс анықтауға әкеледі.Сонымен қатар, химиялық экстракцияда жиі күшті агенттер қолданылады, егер элюция мұқият болмаса, реакция жүйесіне күшті сілтіні енгізу оңай, нәтижесінде дәл емес нәтижелер пайда болады.
Ультрадыбыстық фрагментация физикалық ұсақтауды пайдаланады, оны адам пайдалану үшін POCT саласындағы жетекші кәсіпорын GeneXpert сәтті қолданды және кейбір күрделі үлгілердің (мысалы, Mycobacterium tuberculosis) нуклеин қышқылын алуда абсолютті артықшылығы бар.
Сондықтан нуклеин қышқылын алу сатысымен конфигурацияланған сынақ жинағын немесе құралды таңдау ұсынылады.және ультрадыбыстық экстракция модулі болса, оңтайлы.
3. Қолмен , Жартылай автоматты және толық автоматты?
Бұл жұмыс күшінің құны мен жұмыс тиімділігі мәселесі.Қазіргі уақытта үй жануарлары ауруханаларында штаты жеткіліксіз, нуклеин қышқылын алу және анықтау белгілі бір дағдылар мен тәжірибені қажет ететін жұмыс.Толық автоматты нуклеин қышқылын экстракциялау және анықтау машинасы тамаша таңдау екені сөзсіз.
4. Тұрақты температураны күшейту немесе айнымалы температураны күшейту?
Күшейту реакциясы нуклеин қышқылын анықтау буыны болып табылады және бұл байланысқа қатысатын кәсіби технология күрделі.Шамамен айтқанда, ферменттер нуклеин қышқылын күшейту үшін қолданылады.Күшейту процесінде күшейтілген флуоресценция сигналы немесе енгізілген флуоресценция сигналы анықталады.Жалпы айтқанда, флуоресценция сигналы неғұрлым ерте пайда болса, үлгідегі мақсатты геннің мазмұны соғұрлым көп болады.
Тұрақты температураны күшейту – бұл нуклеин қышқылының бекітілген температурада күшейтілуі, ал айнымалы температуралық күшейту – қатаң түрде денатурация – күйдіру – ұзартуға сәйкес циклдік күшейту.Тұрақты температураны күшейту уақыты орындалды, ал айнымалы температураны күшейту уақытына аспаптың температураның көтерілу мен төмендеуінің жылдамдығы қатты әсер етеді (қазіргі уақытта көптеген өндірушілер шамамен 30 минут ішінде күшейтудің 40 циклін жасай алды).
Егер зертханалық жағдайлар жақсы болса және аймақтарға бөлу қатаң болса, екеуінің арасындағы дәлдік айырмашылығы үлкен болмайды деп айту орынды.Дегенмен, айнымалы температураны күшейту салыстырмалы түрде қысқа уақыт ішінде нуклеин қышқылының көбірек өнімдерін синтездейді.Қатаң аймақтарға бөлінбеген және кәсіби дайындықсыз зертханалар үшін нуклеин қышқылы аэрозольдарының ағып кету қаупі жоғары болады, ағып кету орын алған кезде жалған оң нәтиже пайда болады және оны жою өте қиын.
Сонымен қатар, тұрақты температураны күшейту үлгі күрделі болған кезде спецификалық емес күшейтуге бейім болады (салыстырмалы реакция температурасы төменірек және ұзарту температурасы неғұрлым жоғары болса, праймерді байланыстыру ерекшелігі соғұрлым жақсы болады).
Қазіргі технологияға келетін болсақ, айнымалы температураны күшейту сенімдірек.
5. Нуклеин қышқылының күшейту өнімдерінің ағып кету қаупін қалай болдырмауға болады?
Қазіргі уақытта көптеген өндірушілер үйкеліспен тығыздалған нуклеин қышқылы реакциясының түтігі ретінде безді типті ПТР түтігін таңдайды, ал ПТР айнымалы температурадағы денатурациядағы температуралық денатурация 90 градусқа жетеді.
Центиград.Жылумен кеңею және суықпен қысқарудың қайталанатын процесі ПТР түтігін тығыздау үшін үлкен қиындық тудырады, ал бездік типті ПТР түтігінің ағып кетуі салыстырмалы түрде оңай.
Реакция өнімінің ағып кетуіне жол бермеу үшін реакцияны толығымен тығыздалған жинақ/түтікпен қабылдаған жөн.Нуклеин қышқылын экстракциялау және анықтау үшін толық жабық жинақты әзірлеу мүмкін болса, тамаша болар еді.
Сонымен, New Tech компаниясының жаңа толық автоматты нуклеин қышқылын экстракциялау және анықтау машинасында жоғарыда көрсетілген бес оңтайлы таңдау бар.
Жіберу уақыты: 09 тамыз 2023 ж